Simposio 2015*

Nuestro objetivo …      es educar a profesionales y al público  en general sobre el campo de la micología.

Nuestra visión …   Concienciar a la sociedad puertorriqueña sobre la importancia y desarrollo de estudio de los hongos.

Nuestra misión …   Promover, facilitar y desarrollar actividades dirigidas a la educación e investigación en el campo de la micología.

Puedes contactarnos en Facebook o a nuestro correo electrónico spmicologia@gmail.com

Agradecemos su colaboración y apoyo para que ésta actividad fuera un éxito.

Programa Científico

Moderador: Sr. Christian Vargas, Presidente - Sociedad Estudiantil de Microbiología Industrial

8:00 AM	Registro
8:30 AM	Bienvenida; Dr. Matías Cafaro, Presidente S.P.M.
8:45 AM	Presentación de la cede IMC 2018; Dra. Sharon Cantrell
9:00 AM	Conferencia Magistral Dr. Carlos Chardón Palacios:  “Hot, slow and dry: Culturing previously uncultured fungi”  Dr. Keith A. Seifert
10:00 AM	Afiches – Merienda - Vestíbulo del edificio de Biología
10:30 AM	Potential bioremediation role of manglicolous fungi associated with red mangrove, Rhizophora mangle, in Puerto Rico Emily C. Kelly Castro, Universidad de Puerto Rico-Mayagüez
10:50 AM	Aislamiento y diversidad de hongos patógenos en Sansevieria trifasciata planta ornamental con gran capacidad de propagación en Puerto Rico Janice M. Hernández Méndez, Universidad de Puerto Rico-Mayagüez
11:10 AM	Fungal communities exhibit resistance to dry periods at Guánica Dry Forest Reserve Mishelle Rivera Rivera, Universidad de Puerto Rico-Río Piedras
11:30 AM	Análisis de hongos endófitos en granos de arroz Nicole Colon Carrión, Universidad de Puerto Rico-Cayey
11:50 AM	Diversidad de hongos cultivables asociados a tumores provocados por Hypogeococcus pungens y lesions en Pilosocereus royenii Roberto Carrera Martínez, Universidad de Puerto Rico-Mayagüez
12:10 AM	Almuerzo - Vestíbulo del edificio de Biología
1:30 PM	Premiación y entrega de certificados
2:00 PM	Asamblea Anual de socios S.P.M.

  

Conferencia Magistral 
Dr. Carlos E. Chardon Palacios

Hot, slow and dry: Culturing previously uncultured fungi

KEITH A. SEIFERT

Senior Research Scientist, Eastern Cereal and Oilseed Research Centre

Agriculture & Agri-Food Canada, Ottawa

Studies of environmental DNA reveal unknown fungal lineages and thousands of novel species, apparently comprising the majority of fungi in most ecosystems. The knowledge that so many fungi are unrecovered during conventional isolation provides a challenge: How might we culture them? We are exploring several alternatives methods. We tried dilution to extinction with soil and house dust samples, using normal or moderately xeric agar media. About 10-50% of strains appear represent new or unsequenced species, although many remain sterile and their novelty is only evident from DNA barcoding. We are describing about 100 new Ascomycete species but few Basidiomycetes were isolated. Heating suspensions prior to spread plating led to the discovery of many novelties, especially from soils exposed to forest fires or deliberately burned during agricultural practices. These include the cladosporium-like genus Devriesia, and the humicola-like Leohumicola. The diversity of heat resistant Basidiomycetes isolated was surprising, and included three new species of the xerophilic genus Wallemia. The new fungal class Geminibasidiomycetes, with four heat tolerant and moderately xerophilic species, is sister to the Wallemiomycetes at the base of the Agaricomycotina. The include genera, Geminibasidium and Basidioascus, produce unusual teleomorphs that forcibly discharge the whole basidium. The first known sexually competent species of Paratritirachium, a basal lineage of the Pucciniomycetes, was isolated from burned, hydrocarbon contaminated soils. Several bizarre heat resistant Basidiomycete lineages remain undescribed. Oddly, fungi isolated by heat treatment are often also xero- or halotolerant. The apparent age of these lineages suggests that they originated when the Earth was hotter, or saline environments were more widespread. This suggests other strategies for isolating novel lineages by developing isolation methods that mimic environmental conditions of earlier geological eras.

About Dr. Keith Seifert…

            He is adjunct professor of the Department of Biology at the University of Ottawa and Carleton University in Canada. His Ph.D. degree is from Rijsuniversitei Utrecht, the Netherlands, where he studied wood degradation by Stilbella and allied hyphomycetes. Also, he holds a M.S. degree in Botany from the University of British Columbia on wood decay caused by Dacrymycetales. Dr. Seifert is author of 8 books and has published more than 200 articles. His areas of expertise include taxonomy, phylogenetics and systematics of hyphomycetes, mycotoxins, application of fungal taxonomy to genomics, plant pathology especially the genera Fusarium and Penicillium. Dr. Seifert is highly regarded in the mycological society for his expertise in anamorphic fungi, which has been recognized through several awards including the 2013 MSA Fellow Award. He serves as editor in many mycological journal including Mycologia, Sydowia and Persoonia among others. At the present, he is a research scientist in Agriculture and Agri-Food Canada, Ottawa. He is the president of the International Mycological Association. 

Resúmenes de los presentaciones orales

Potential bioremediation role of manglicolous fungi associated with red mangrove, Rhizophora mangle, in Puerto Rico

Kelly-Castro E. C., Ortiz Gómez O. E., Real Ramírez I., and Cafaro M. J.

Universidad de Puerto Rico, Recinto de Mayagüez, Departamento de Biología

emily.kelly@upr.edu

Lignolytic fungi in mangrove ecosystems are the main organisms involved in carbon recycling from lignin. Fungi have specific enzymes involved in lignin degradation, such as lignin and Mn peroxidases, and laccases. Previous studies have shown that lignolytic fungi can also degrade polycyclic hydrocarbons (PAHs). In order to study lignin degradation in mangrove ecosystems, we isolated fungi from wood and decaying leaves in Bahia Sucia, Cabo Rojo and La Parguera, Lajas. The azo dye Congo Red and naphthalene have similar chemical structure to lignin, thus serving as proxy for degradation studies of the latter. Decolorization of the dye over 20 days for 30 different fungal isolates was studied. Fungi were grown in a liquid basal medium with Congo Red or naphthalene as their only carbon and energy source at 28° C, 150 rpm. As a positive control we used Asperguillus flavus. Congo Red decolorization was measured by absorbance at 490 nm while naphthalene presence was measured at 320 nm. Fungal growth was measured by dry weight biomass. We also determined total protein in order to compare enzyme production among samples. Maximum decolorization of Congo Red was observed in two isolates: Pencillium citrinum isolate RmBS2-1-2 and an unidentified isolate RmBS10-1-1 with 99.80%. Purpureocillium lilacinum RmBS1 showed 56.78% of naphthalene degradation from the medium after a period of 10 days. Pencillium citrinum isolate RmBS2-1-2 generated 50 mg of biomass, Purpureocillium lilacinum isolate RmBS1 generated 66 mg and the unidentified isolate RmBS10-1-1 generated the most biomass (1000mg) under the experimental conditions. An enzymatic assay for LiP, MnP, and laccase production were also conducted. We can conclude that the isolates have the capacity to degraded Congo red dye and are also able to degrade PAHs such as naphthalene

Aislamiento y diversidad de hongos patógenos en Sansevieria trifasciata, planta ornamental con gran capacidad de propagación en Puerto Rico.

Janice M. Hernández Méndez 1, Darianne M. Álvarez Franceschi 2, Lydia I. Rivera Vargas3

1Estudiante Graduada, 2Estudiante Graduada, 3 Catedrática, Departamento de Ciencias Agroambientales

janice.hernandez3@upr.edu

Sansevieria trifasciata es una planta ornamental suculenta de origen africano conocida comúnmente como lengua de vaca o chucho. Es utilizada frecuentemente como planta de interiores y en diseños de jardines paisajistas, por lo cual posee una gran capacidad de propagación en Puerto Rico. Sin embargo la presencia de hongos fitopatógenos reduce el valor comercial de esta planta. Es por esto, que el objetivo de esta investigación fue lograr aislar e identificar hongos patógenos de tallos, raíces y hojas de S. trifasciata. Para esto se esterilizó superficialmente el tejido vegetal y se prepararon cortes histológicos de las lesiones. Las secciones de tejido se transfirieron a medios de cultivo para el aislamiento y purificación de hongos. Para la identificación de hongos se utilizaron claves taxonómicas y se realizarán análisis de ADN de ciertas regiones genéticas. Dentro de las lesiones observadas se encuentran manchas de color marrón y rodeadas de un halo amarillos, luego tornándose necrosis en la hoja de esta planta. Algunos hongos identificados hasta el momento son Pestalotia, Curvularia y Trichoderma. En fin, la presencia de estos hongos fitopatógenos

Fungal communities exhibit resistance to dry periods at the Guánica Dry Forest Reserve

Rivera-Rivera M.J.¹, Acosta-Martínez V.² y Cuevas E.¹

¹Department of Biology and Center for Applied Tropical Ecology and Conservation, University of Puerto Rico, Rio Piedras, Puerto Rico

²United States Department of Agriculture, Agricultural Research Service, Lubbock Texas.

yersiniamjr@hotmail.com

Tropical dry forest experience seasonal drought which is more pronounced with regard to dry and wet periods than to seasonal fluctuations in temperature. Evaluation of soil fungal communities has been limited by the lack of robust assessments that can explore the vast complex structure and diversity of these communities in soil. Our objective was to combine fatty acid methyl ester (FAME) and pyrosequencing techniques to evaluate soil fungal community structure and diversity during the rainiest and driest months at the Guánica Dry Forest. In addition, we evaluated biogeochemical functionality of the microbial communities via nutrient cycling enzymes activities (EAs). Samples were collected from three dominant tree species at the coastal plateau of the Guánica Dry Forest. Fungal FAMES did not vary significantly with regards to rainy and dry period (p>0.05) and only two of the four markers varied due to tree species (p<0 .05="" 18:3="" accumulate="" accumulated="" also="" and="" arbuscular="" are="" as="" be="" believe="" benefits="" buffering="" by="" c="" carbon="" communities="" correlated="" cycling.="" data="" demonstrated="" did="" differences="" drought="" dry="" due="" during="" eas="" enzyme="" enzymes="" exchangers="" fluctuations="" fungal="" has="" importance="" in="" indicated="" kruskal="" leaf="" litter="" manova.="" marker="" maximum="" may="" microbial="" moisture="" mycorrhiza="" nbsp="" nor="" not="" nutrient="" o:p="" of="" only="" operation="" or="" our="" p="" period="" periods.="" phosphate="" pyrosequencing="" rainy="" regarding="" regards="" reveal="" s="" saprophytic="" significant="" significantly="" soil="" species="" study="" sulphur="" taxonomic="" temperature="" test.="" that="" the="" this="" through="" time.="" to="" tree="" trees="" units="" varied="" wallis="" we="" whereas="" which="" with="">

Análisis de Hongos Endófitos en Granos de Arroz

Nicole Colon Carrión1, Chad Lozada1

Universidad de Puerto Rico en Cayey1, Departamento de Ciencias Naturales

Nicole.colon11@upr.edu

Desde la antigüedad, el arroz ha sido uno de los cultivos más importantes a nivel mundial, aproximadamente un 75% de la población humana lo incluye en su dieta diaria debido a su valor nutricional. No obstante, estos cultivos pueden ser atacados por diversos patógenos, causando efectos negativos en la salud. Los hongos han sido uno de los principales contaminantes de cultivos, como los granos y cereales. El  propósito de este estudio fué identificar y clasificar los hongos endófitos presentes en granos de arroz regular e integral y amplificar la región ITS utilizando PCR. Una estilización superficial de los granos fue realizada previo a su aislamiento. Los granos fueron aislados en medio de SDA por 7 días a 25°C, y purificados en medio de PDA  utilizando  los mismos estándares. Los resultados mostraron que un 10% de los granos de arroz regular esterilizados produjeron crecimiento de hongos endófitos, mientras que para el arroz integral se obtuvo un 44%. Los granos no esterilizados produjeron una mayor cantidad de hongos; un 20% de los granos regulares sin esterilizar produjeron crecimiento de hongos, mientras que en los integrales fué 56%. Estos resultados pueden deberse a que el arroz regular es un producto previamente procesado antes de ser distribuido en el mercado de venta, lo cual reduce el número hongos endófitos presentes. Mientras que el arroz integral pasa por un tipo procesamiento diferente al del arroz regular el cual utiliza pocos químicos y desinfectantes. Durante la clasificación de hongos se encontró una diversidad de géneros en los granos de arroz original, mientras que en los granos de arroz integral los géneros más abundante fueron Aspergillus y Penicillium. Al ser despojado de integridad natural, el arroz regular no contiene una gran diversidad de géneros presentes ya que provee pocos nutrientes para el desarrollo de estos hongos. El arroz integral al contener más nutrientes, provee un mejor ambiente para el crecimiento de una gran diversidad de hongos.

Diversidad de hongos cultivables asociados a tumores provocados por Hypogeococcus pungens y lesiones en Pilosocereus royenii

Roberto Carrera-Martínez* y Sandra L. Maldonado-Ramírez

Departamento de Biología, Universidad de Puerto Rico, Recinto de Mayagüez, Mayagüez, Puerto Rico.

*roberto.carrera@upr.edu

Las cactáceas columnares son componentes esenciales en los bosques secos y ecosistemas áridos del nuevo mundo. Actualmente, las cactáceas columnares de Puerto Rico están sufriendo el ataque de la chinche harinosa (HCM), Hypogeococcus pungens. El HCM está afectando a las siete especies de cactáceas de tipo columnar y de barril en Puerto Rico, incluyendo a Pilosocereus royenii, comúnmente conocido como sebucán. En adición al ataque de HCM, frecuentemente se observa la presencia de manchas necróticas en la epidermis de Pilosocereus royenii. Esta investigación tuvo como objetivo determinar la diversidad de hongos cultivables presentes en tumores que se asumen son provocados por HCM y en las manchas necróticas, luego de determinar cuál medio de cultivo era el más apto para el crecimiento de estos hongos cultivables. Utilizando un hisopo estéril se obtuvieron tres muestras de tres manchas y tres tumores distintos del mismo individuo de sebucán luego de esterilizar superficialmente el tejido vegetal. Se inocularon las muestras en Agar con Extracto de Malta (MEA), Agar con Harina de Maíz  (CMA), Sabouroud Dextrose Agar (SDA) y MEA enriquecido con extracto del cactus. El MEA y MEA con extracto del cactus fueron los más efectivos en la recuperación de hongos cultivables. Los hongos más abundantes incluyen un morfotipo de colonias verdes oscuras con crecimiento circular sin elevación,  Penicillium sp y Colletotrichum sp. En adición se observó el crecimiento de una levadura rosada y otra especie blanca y un morfotipo d

Carteles Científicos

Vestíbulo del edificio de Biología-Universidad de Puerto Rico, Mayagüez

1	Hongos fitopatógenos que afectan el pimiento Cubanelle (Capsicum annuum var. annuum) en Puerto Rico Yilka M. García Rivera, Darianne M. Álvarez & Lydia I. Rivera
2	Marine sponges and their fungal associates as bioindicators of heavy metal pollution in coastal environments Gualberto Rosado-Rodríguez & Ernesto Otero-Morales
3	Mycorrhizal effects on ‘Ají dulce’ (Capsicum chinense) Carla M. Aponte López, Johann J. Cancel Villamil, Liszonette Medina, Linda Wessel Beaver & Matías J. Cafaro
4	Degradation of aromatic compounds by Purpureocillium lilacinum Imperio Real Ramírez, Olga E. Ortíz Gómez, Emily C. Kelly Castro & Matías J. Cafaro
5	Phytopathogenic fungi isolated from Eryngium foetidium L. Zenaide M. González Sandoval & Lydia I. Rivera Vargas
6	Molecular identification of fungi associated with birds in Boquerón Charles A. Castro Soto, Olga E. Ortíz Gómez & Matías J. Cafaro
7	Metagenomic analysis of fungal communities of the mangrove ecosystem in Puerto Rico’s Southern Karst Jean Fabre, A. Rodriguez, J. Cuevas, E. Torres, M. Cafaro,T. Glavina, J. Kimbrell, J. Jansson & F. Godoy-Vitorino
8	Hongos foliares pertenecientes a la Familia Botryosphaeriaceace y una especie no identificada afectando el cultivo de caña de azúcar  (Saccharum officinarum L.) en Puerto Rico Mayra Cathme, Darianne Álvarez & Lydia I. Rivera Vargas
9	Micoparasitismo de la roya del gandul, Uromyces dolicholi José L Cordero, Darianne M. Alvarez & Lydia I. Rivera-Vargas
10	Lasiodiplodia sp. y otros hongos patógenos de la pitahaya (Hylocereus undatus) Yehokhanan L. Lugo Ramos,  Darianne M. Álvarez Francheschi, Lydia I. Rivera Vargas & Bryan Brunner
11	Hongos asociados a las raíces de Oplonia spinosa Héctor J. Rivera Jiménez & Sandra L. Maldonado Ramírez
12	Especies de la familia Botryosphaeriaceae afectando el follaje y fruto de los cítricos (Citrus spp.) en Puerto Rico Casiani Soto Ramos, Darianne Álvarez & Lydia I. Rivera Vargas
13	Evaluación de la patogenicidad de hongos asociados a la muerte regresiva del bejuco de ñame florido (Dioscorea alata cv. Florido) en Puerto Rico Yara I. Rosado Rivera & Merari Feliciano Rivera
14	Growth inhibition of yeast isolated from SCUBA diving equipment found in La Parguera, Lajas, Puerto Rico by using common household chemicals Margell Vega Padilla, Amelia Rodríguez & Ana E. Pérez Matos
15	Identificación mediante grupos de ompatibilidad vegetativa de las razas de Fusarium oxysporum f. sp. cubense afectando los cultivos de bananos en Puerto Rico Raymond García Rodríguez , Lydia Rivera Vargas & Brian Irish
16	Plant pathogenic fungi related to ten endangered plant species at the Karst Region in Puerto Rico Cecilia Monclova-Santana, Merari Feliciano-Rivera & Lydia Rivera Vargas
17	Hyphomycetes acuáticos present in foam samples from Cagüítas River, Caguas Puerto Rico Kiara Gómez Marie & Chad Lozada Troche
18	Spatial distribution of soil and leaf litter fungal communities in a simulated hurricane experiment Gabriel Allison, K. González & Sharon Cantrell
19	Isolation and identification of microorganisms in four species of angiosperms Christian Pagán, Reyes Colón C. y Acevedo Alfaro J.
20	CdS/Se nanoparticles with fungistatic activity on Dermatophytes Jaime Cardona López, Yorki Serrano Natal, Nancy Arroyo & Luis Alamo-Nole
21	Characterization of Debaromyces hansenii Strains as Potential Treatment Against Superficial Mycosis. Yorki Serrano, Jaime Cardona & Nancy Arroyo
22	Essential Oils’ Fungistatic and Fungicidal Activity Against Penicillium sp., A Postharvest Fungus, Affecting Citrus Crops In Puerto Rico.  Stephanie Torres, Kiara Rivera & Nancy Arroyo
23	Biodiversidad de Hongos Macroscópicos en los Municipios de Atolinga, Monte Escobedo, Tepetongo, Tlaltenango y Villanueva; Zacatecas, México. Haro-Luna M.X., Calzada-Rodríguez B.E., Miranda-Delgado P. & Reveles-Hernández R.G.
24	Growth inhibition and induced sporulation by caffeine in the plant pathogen Penicillium expansum. Vivianaliz Sánchez Pérez, Michael C. Tirado y Jasmine Seda Miró
25	Seasonality and prevalence of Aselaria latiboniwa hosted in the hindgut of Litthorophiloscia culebrae. María del Mar Monroig y Matías Cafaro
26	Endophytioc fungi from the black mangrove Avicennia germanans in Puerto Rico: their antimicrobial potencial. Edaris Rodríguez Izquierdo y Matías Cafaro
27	Identificación molecular de Colletotrichum sp. aislados de Cucurbitaceas Ángel G. Colón,  Darianne M. Alvaréz  y Lydia I. Rivera Vargas
28	Distribución de Badhamia gracilis (Phasarales, Phasaraceae) en Cactus en el Suroeste de Puerto RicoOscar Pérez-Laguillo, Marlene Lorenzo Suarez,  Maranyelie Ramos-Acevedo, Cristina Rodríguez-Chaluisant e Yrenis Caraballo-Chaparro

  

Resúmenes de los carteles científicos

Hongos Fitopatógenos Que Afectan El Pimiento Cubanelle (Capsicum annuum var. annuum) en Puerto Rico

Yilka M. García Rivera¹, Darianne M. Álvarez² y Lydia I. Rivera³

¹Estudiante Sub-graduado ²Estudiante Graduado y ³Catedrática de la Universidad de Puerto Rico Recinto de Mayagüez, Departamento de Cultivos y Ciencias Agroambientales Mayagüez, P.R.  yilka.garcia@upr.edu

Los pimientos (Capsicum spp.) son sumamente utilizados en las artes culinarias para añadir color y sabor a los platos que se confeccionen, también son una buena fuente de minerales y vitaminas. Este cultivo pertenece a la familia Solanaceae, incluyendo los cultivos de tomate, berenjena, papa y tabaco. La importancia de esta investigación es identificar hongos fitopatógenos que afecten el pimiento y su producción en Puerto Rico. La variedad evaluada para este estudio fue el pimiento cubanelle (Capsicum annuum var. annuum). Se aislaron dos hongos desconocidos del fruto, hoja y semilla. El Desconocido #1 se aisló de la semilla y hoja, presentaba una sintomatología en forma de necrosis en la testa y manchas foliares. El micelio del desconocido #1 era de color grisáceo en gradiente. El desconocido #2 se aisló del fruto, este presentaba una sintomatología de pudrición y círculos necróticos. El micelio del desconocido #2 era de color negro uniforme. Se realizará una identificación molecular mediante la extracción de ADN de ambos patógenos y su amplificación con el gen ITS5 e ITS4. Se realizó una prueba de germinación de esporas para el desconocido #1 y luego de ser observado bajo el microscopio de luz se identificó preliminarmente como Bipolaris spp. También se realizaron pruebas de patogenicidad para ambos desconocidos utilizando frutos y semillas sanas, se obtuvo la misma sintomatología antes observada.

Marine Sponges and their Fungal Associates as Bioindicators of Heavy Metal Pollution in Coastal Environments

Rosado-Rodríguez G.¹ and Otero-Morales E.¹

¹Department of Marine Sciences, University of Puerto Rico at Mayagüez, Puerto Rico

gualberto.rosado@upr.edu

Coastal ecosystems are the dynamic link between terrestrial and marine environments. Unfortunately, these marine ecosystems have been negatively affected by non-sustainable anthropogenic activities in coastal and in-land areas. It is important therefore, to monitor the effects of coastal and in-land activities on marine environments in order to properly recommend policies and management strategies that will allow the protection and restoration of these delicate environments. Marine sponges are filter feeding organisms that can be found in most marine environments. Their water filtering capabilities, and the potential to accumulate heavy metals as well as contaminants, make them candidates for biomonitoring of marine ecosystem health. The objective of this work was to complete an assessment of native marine sponges and their fungal associates from Puerto Rico. Their potential as bioindicators of heavy metal pollution in coastal environments was then evaluated. Fungal communities associated to marine sponges were assessed to determine if their composition co-varies with the presence of heavy metals. Pieces of approximately 1cm³ of the sponges were triturated in a blender with 10 mL of sterile natural sea water. Serial dilutions of the resulting suspension were performed from 10^-1 to 10^-4 and each dilution was plated in triplicate in marine PDA supplemented with streptomycin and penicillin. Plates were incubated at 22°C for up to 60 days to allow the isolation of slow growing colonies. Individual colonies were isolated and characterized by morphology and sequencing of the ITS region. Heavy metals from marine sponges were analyzed by ICP-MS. Fungi associated with the sponges showed variations in community composition among localities and sponge species. Also, sponges with low bioaccumulation of heavy metals showed a higher number of fungal species. Our results suggest that heavy metal accumulation by the sponges may play an important role on fungal community composition.

Mycorrhizal effects on ‘Ají dulce’ (Capsicum chinense)

Aponte-López C.M.¹, Cancel-Villamil J.J.¹, Medina-de Jésus Liszonette ¹, Wessel-Beaver Linda² and Cafaro Matías J.¹

¹Department of Biology University of Puerto Rico, Mayagüez Campus, Mayagüez, Puerto Rico

²Department of Crops and Agro-Environmental Sciences, University of Puerto Rico at Mayagüez, Mayagüez, PR, 00680  carla.aponte@upr.edu

Capsicum chinense is widely cultivated in the Caribbean region. Most types are pungent, such as 'Scotch Bonnet' and 'Habanero'. In Puerto Rico, non-pungent types are preferred and referred to as "ají dulce" or sweet chili pepper. Sweet chili pepper is one of the main crops cultivated on the island and is consumed as part of the local cuisine. It is also known for being a good source of vitamins A, C, E and for its antioxidant properties. Currently, in commercial agriculture, the use of chemical fertilizers dominates the local market, while biological ones are overlooked. Symbiotic relationships between mycorrhizal fungi and the roots of vascular plants can serve as biological crop enhancers. The purpose of this research was to determine, characterize and identify the mycorrhizae associated with locally grown C. chinense in the western area of Puerto Rico. We collected “ají dulce” roots and surrounding soil from plants growing in experimental plots at UPRM. Roots were cleared in KOH 10% at 60°C for one hour and then placed in 2% HCl for 20 minutes, stained using Trypan blue 0.4% for 72 hours and preserved in glycerol. After processing samples and staining, fungi were morphologically identified using taxonomic keys. Among the genera identified so far we found Glomus and Acaulospora. We also grew “ají dulce” under six treatments using commercial Promix® BX for general purpose, Promix® Mycorrhizae (Glomus intraradices), Promix® with 25% soil from the UPRM greenhouse, Promix® with fertilizer, Promix® Mycorrhizae (Glomus intraradices) with fertilizer and Promix® with 25% soil from the UPRM greenhouse with fertilizer. Significant differences were obtained when compared using T-test, obtaining a p-value <0 .0001="" and="" between="" bx="" first="" fruit="" greater="" in="" leaves="" length="" mycorrhizae="" number.="" o:p="" one="" promix="" resulted="" stem="" the="" treatments="" where="">

Degradation of aromatic compounds by Purpureocillium lilacinum

Real-Ramírez I.¹, Ortiz-Gómez O¹. E., Kelly-Castro E¹. C., Cafaro M. J.¹

¹Department of Biology, University of Puerto Rico-Mayagüez, Mayagüez, Puerto Rico

imperio.real@upr.edu

Purpureocillium lilacinum is a saprophytic filamentous fungus found in soils, decaying vegetation, insects, nematodes, animals, humans and indoor air. It has potential uses as a biocontrol agent, as it has been extensively studied against insects and root-knot nematodes. It is also a clinically important species, as it can cause infection in both, immunocompromised and immunocompetent patients. However, its potential as a bioremediation agent has not been studied. The objective of this study was to determine its potential ability as a bioremediation fungus. Purpureocillium lilacinum was isolated in 5% NaCl PDA from red mangrove wood. Congo Red and naphthalene degradation assays were conducted to determine its degradation potential. Samples were incubated in the shaker at 30ºC, 140 rpm for 10-20 days. The absorbance reading was done every two days at 320nm for naphthalene and at 490nm for Congo Red. Lignolytic enzyme assays were conducted for all samples. After 10 days, P. lilacinum reached 98.95% Congo Red and 46.70% naphthalene degradation. Our data show that P. lilacinum has a high potential as bioremediation fungus since both compounds were degraded.

Phytopathogenic fungi isolated from Eryngium foetidium L.

Zenaide M. González Sandoval¹ and Lydia I. Rivera Vargas²

1Program of General Agriculture, College of Agricultural Sciences, University Of Puerto Rico, Mayagüez, Puerto Rico

²Department of Agro-Environmental Sciences, College of Agricultural Sciences, University of Puerto Rico,Mayagüez, Puerto Rico

zenaide.gonzalez@upr.edu

 Eryngium foetidium L. commonly known as culantro, Mexican coriander or “recao” is an important herb in daily Puerto Rican cuisine. According to Puerto Rico’s annual gross income, culantro generated $543,000 with a total of 5,843 cto or mazos produced and sold for $92.93/unit, during fiscal year 2013- 2014. Even though culantro is widely used as seasoning, no information is currently available related about its fungal pathogens. The objective of our research was to identify fungi associated with symptoms observed in E. foetidum. Leaf and root samples showing symptoms were collected from supermarkets, markets, home gardens and farms.  Sample sections (4mm) were superficially disinfected and transferred to Potato Dextrose Agar to isolate fungi. Fungal spores were examined using a light microscope for morphological identification.  Colletotrichum sp., a group of fungi belonging to the Botryosphaeriaceae family and a bacterium, Xanthomonas campestris were identified from leaf samples. Sclerotium rolfsii was identified from root tissue. This group of fungi will be further characterized on the basis of pathogenicity and DNA analysis. The information obtained will be valuable to establishe management practices at nurseries around the island. 

Molecular identification of fungi associated with birds in Boquerón

Castro Soto C.A. ¹, Ortíz Gómez O. E.¹, Cafaro M. J.¹

¹Departamento de Biología, Recinto Universitario de Mayagüez,

Universidad de Puerto Rico, Mayaguez, PR 0068

charles.castro@upr.edu

This investigation studies the different types of fungi associated with migratory birds in Puerto Rico. The two bird species sampled include the local moorhen Gallinula chloropus and the migratory blue-wing teal Anas discors. The common moorhen lives in Puerto Rico’s wetlands and is one of the species that can be hunted in limited quantities during the hunting season (November-January). On the other hand, the blue-wing teal migrates to Puerto Rico from October to the winter. Samples from the cloaca with a sterile cotton swab and from feathers were collected from dead birds hunted in the “Refugio de Vida Silvestre de Boqueron” in two consecutive hunting seasons, 2013-2014 and 2014-2015. Samples were cultured on SDA or PDA media containing antibiotics. Isolated fungi were transferred to fresh media and subculture for DNA extraction using the CTAB protocol. The 18S rDNA gene was amplified by PCR using the fungal-specific primers NS1 and NS4. We processed 167 fungal isolates including yeast and filamentous fungi. Several samples amplified in the first attempt, but many needed increased MgCl₂ concentration and high-specificity additives. So far we have obtained 72 amplification products ranging between 500-575 bp in size, which is expected for this partial gene product. Sequencing of samples is currently underway, but morphological identification has shown the presence of the genera, Aspergillus, Cladosporium, Cylindrocladium, Fusarium, Microsporum, Mucor, Paecilomyces, Penicillium and Pestalotia.

Metagenomic Analysis of Fungal Communities of the Mangrove Ecosystem in Puerto Rico’s Southern Karst

Fabre Albarrán J.¹ , Rodríguez A.¹,  Cuevas J.¹, Torres E. ¹, Cafaro M. ², Glavina T. ³, Kimbrell J. ³, Jansson J. ⁴ and Godoy-Vitorino F.¹

¹Inter American University of Puerto Rico, Metropolitan Campus, San Juan, PR

²University of Puerto Rico, Mayagüez Campus, Mayagüez, PR

³DOE Joint Genome Institute, Walnut Creek, CA, USA

⁴DOE Pacific Northwest National Laboratory, Richland, WA

Jeangfabre@gmail.com

The karst region of Puerto Rico is the most important tropical karst region in the United States’ territories. Mature mangrove forests are subjected to unique xeric and edaphically stressed conditions, including scarce rainfall and high temperatures. Fungi play an important role in recycling nutrients used by plants and the invertebrate fauna and they may reveal to be a source of useful glycolytic enzymes.  The present study was carried out to understand the mycological differences between red (Rhizophora mangle) and black (Avicenia germinans) mangrove niches, and to identify key taxa that may become targets for the biofuel industry.A total of 60 samples were acquired from red and black mangrove sites including soil, leaf-litter, prop roots and leaves. Genomic DNA was extracted using the MoBio Powersoil kit, and the ITS2 region was sequenced with the Illumina platform. Sequence analyses were performed with QIIME using the UNITE database as reference. Statistical analyses were done in the R package.Ten million sequences were binned into 6,016 fungal OTUs in 7 phyla, with high dominance of Ascomycota (over 80%) and Basidiomycota (~5%), while other phyla displayed an abundance lower than 1%. Betadiversity plots differentiate the mycobiome between black and red mangrove soils and indicate a significant abundance of Neocallimastigaceae, Amorosia, Hortaea and Devresia in the black mangrove; while the red mangrove exhibits higher abundance of Gibberella and Phaenoctriella (Halosphaeriaceae), halotolerant fungi. The leaf-litter and leaf samples of the black mangrove exhibit a higher abundance of Cladosporium (Glycoside Hydrolase rich) and Amorosia (endophytic) while the red mangrove rhizosphere is enriched in Rubrinectria, Hysterium and Cocodinium. We found that the mycobiome of the mangrove forests is niche-specific, with dominant, fiber degrading rich taxa in the black mangrove, and halotolerant fungi with detoxification capabilities in the red mangrove, rich in plant secondary compounds. These preliminary data show the great biotechnological potential of the Puerto Rican Mangrove forests.

Hongos foliares pertenecientes a la Familia Botryosphaeriaceace y una especie no identificada afectando el cultivo de caña de azúcar  (Saccharum officinarum L.) en Puerto Rico

Mayra Cathme¹, Darianne Álvarez¹ y Lydia I. Rivera Vargas².

¹ Estudiantes Graduadas y ² Catedrática del Departamento de Cultivos Agroambientales, Universidad de Puerto Rico, Recinto de Mayagüez, Puerto Rico.

mayra.cathme@upr.edu

La caña de azúcar  (Saccharum officinarum L.) es uno de los cultivos más importantes a nivel mundial. Según la FAO, en el año 2014 se reportó una producción aproximada de 182.0 millones de toneladas. Recientemente este cultivo está siendo impulsado con el fin de sembrar aproximadamente 8 mil hectáreas para generar parte de la materia prima necesaria para las industrias de ron de la isla. Con la reactivación del cultivo también surgirán problemas fitosanitarios que podrían limitar la producción del cultivo. Por esta razón se colectaron muestras para caracterizar enfermedades fúngicas foliares no reportadas en caña en la isla. La investigación fue realizada en el Laboratorio de Fitopatología de la Universidad de Puerto Rico-Recinto Mayagüez. El aislamiento de las muestras se realizó medio de cultivo sintético (PDA) de los cuales se obtuvo un aislamiento monosporico para su posterior identificación y caracterización. La mayoría de los aislados obtenidos no presentaron estructuras de reproducción para su identificación morfológica. Basado en las características macroscópicas como el desarrollo de las colonias, tipo de micelio y pigmentación, se han catalogado dentro de la familia Botryosphaeriaceace.  En adición se aisló un hongo desconocido de micelio grisáceo obtenido de una lesión de color rojo en la venación central de la hoja. El hongo produce dicha coloración rojiza en medios de cultivos sintéticos. Las pruebas de patogenicidad realizadas con tres de los aislados de hongos produjeron manchas necróticas en el tejido foliar de aproximadamente 2.5 cm de largo, tres días después de la inoculación. Las colonias fueron re-aislados completando así  los postulados de Koch. Con el propósito de identificar las especies de hongos patogénicos encontradas, se realizó extracción de ADN y se amplificó mediante PCR dos regiones genéticas (i.e. ITS y EF-1). Los tres aislados en estudio amplificaron en gel de agar regiones para ITS mientras que para EF-1  tan solo una muestra. Posteriormente los aislados se enviarán a secuenciar para poder determinar a qué especie pertenecen.

Micoparasitismo de la roya del gabdúl, Uromyces dolicholi

José L Cordero1, Darianne M. Alvarez2, Lydia I. Rivera-Vargas3

1 Estudiante subgraduado, 2graduada, y  3Catedrática, Departamento de Ciencias Agroambientales, Universidad de Puerto Rico, Recinto de Mayagüez, Mayagüez, Puerto Rico.

Cajanus cajan [(L.) Millsp.] conocido comúnmente como el gandul, es originario de la India.  Éste es utilizado como fuente de alimento en países tropicales por poseer hasta un 30% de proteína de alta calidad, y es una fuente de aminoácidos esenciales.  Una diversidad de  enfermedades causadas por hongos afecta sus raíces, tallos, pecíolos, hojas, vainas y semillas en zonas tropicales y subtropicales de los Estados Unidos y  Puerto Rico. Existen limitados estudios informando sobre el parasitismo de enfermedades causadas por hongos en el follaje de gandul. Nuestra investigación está dirigida a estudiar hongos parasíticos en pústulas de la roya de gandul, Uromyces dolicholi Arth. Se utilizó microscopía de luz y electrónica de rastreo para identificar los hongos asociados a los uredios de U. dolicholi. Se realizaron cámaras húmedas para inducir el crecimiento y la esporulación de los mismos. Se observaron dos tipos de conidias asociadas a los uredios, unas  de color marrón, multicelulares, tentativamente identificadas como Septonema sp. y otro morfotipo de conidias unicelulares hialinas de etiología desconocida.  Este último presenta un crecimiento de micelio blanco profuso tanto en el haz como en el envés de las hojas.

Lasiodiplodia sp. y otros Hongos Patógenos de la Pitahaya (Hylocereus undatus)

Yehokhanan L. Lugo Ramos¹ Darianne M. Álvarez Francheschi¹ ,  Lydia I. Rivera Vargas² y Bryan Brunner²

¹Estudiantes Graduados y ²Catedráticos, Departamento de Ciencias Agroambientales, Colegio de Ciencias Agrícolas,  UPR- Recinto de Mayagüez

yehokhanan.lugo@upr.edu

La pitahaya (Hylecereus undatus (Haworth) Britton & Rose) es un cactus columnar de importancia por la producción de frutas exóticas. Esta planta se ha adaptado a condiciones de alta humedad, ya sea por inundación del suelo o por lluvias constantes, pero es afectada por plagas insectiles y enfermedades causadas por microrganismos patógenos. Sin embargo, es muy escasa la literatura existente sobre hongos patógenos de la pitahaya. Es por lo antes expuesto que este estudio está dirigido a identificar los hongos fitopatógenos asociados al cultivo de pitahaya en el área sur de Puerto Rico. Para esto se aislaron hongos en medio de cultivo (PDA) a partir   de lesiones circulares hundidas, de coloración blanca con estructuras  negras en el centro. Se examinó la morfología mediante preparación de laminillas semipermanentes utilizando el microscopio de luz. La mayoría de los hongos encontrados presentan micelio obscuro septado, profuso, pero no producen estructuras de reproducción que nos permitan identificarlos, con excepción de Lasiodiplodia sp. Para inducir su esporulación se han evaluado los medios de cultivo de agar de agua y agar con hojas de clavel infructuosamente. Con el propósito de identificar dichos hongos se utilizará análisis de ADN de  la región ITS de ADNr, el gen de β-tubulina y el factor de elongación. Al presente se están desarrollando pruebas de patogenicidad en cámaras húmedas con los hongos aislados.  Este estudio aportará información básica sobre hongos patógenos que pueden estar afectando la producción de pitahaya en la isla y nos permitirá desarrollar un plan de acción para su control a nivel de campo. 

Hongos Asociados a las Raíces de Oplonia spinosa

Héctor J. Rivera Jiménez y Sandra L. Maldonado Ramírez

Universidad de Puerto Rico, Departamento de Biología, Recinto Universitario de Mayagüez

hector.rivera57@upr.edu

Oplonia spinosa es un arbusto de distribución limitada en Puerto Rico ya que se ha visto grandemente afectado por la desaparición de su hábitat.  Esta planta se considera el único hospedero para los huevos y larvas de Atlantea tulita, una mariposa endémica de Puerto Rico amenazada y en peligro de extinción.  La limitada información disponible de esta planta dificulta los intentos de protegerla y pone en juego la supervivencia de A. tulita. Resulta necesario y urgente generar información que permita llevar a cabo proyectos de reforestación efectivos para la conservación de ambas especies. El estudio de los hongos endófitos y micorrízicos asociados a O. spinosa es vital ya que estos juegan un papel importante en la supervivencia de muchas plantas promoviendo su crecimiento al facilitar la absorción de nutrientes y brindando protección contra factores ambientales adversos y diversos patógenos. Para este estudio se recolectaron raíces de O. spinosa en los meses de octubre y febrero las cuales fueron cortadas y esterilizadas superficialmente. Las raíces fueron incubadas por 24 horas a 25º C, luego fueron congeladas a -50º C por 24 horas y finalmente maceradas.  Parte de las raíces colectadas en febrero fueron incubadas a 25º C por 24 horas y luego fueron trituradas.  Se prepararon diluciones en serie para las raíces sometidas a ambos tratamientos. Los hongos fueron cultivados en PDA, PDA suplementado con lignina y celulosa y PDA con biotina y tiamina por cinco días a 25º C. De las 44 morfologías aisladas, actualmente se han identificado 19. Entre los géneros encontrados se incluyen: Aspergillus, Penicillium, Trichoderma, Cladosporium, Fusarium y Sporormiella.

  

Especies de la familia Botryosphaeriaceae afectando el follaje y fruto de los cítricos (Citrus spp.) en Puerto Rico

Soto-Ramos C.M.¹, Álvarez-Franceschi D.¹ y Rivera-Vargas L. I.¹

¹ Departamento de Cultivos y Ciencias Agroambientales, Universidad de Puerto Rico, Mayagüez, Puerto Rico

casiani.soto@upr.edu

Los cítricos son frutas de gran importancia económica a nivel mundial, con gran demanda de consumo por poseer alto contenido en vitamina C y ácido cítrico.  Su producción se ve afectada por varios factores entre los cuales se encuentran  las enfermedades causadas por hongos. El objetivo de esta investigación fue identificar los hongos causantes de manchas foliares en diversas especies de cítricos tales como la china (Citrus sinensis) y el limón (Citrus limon).  Para desarrollar esta investigación se recolectaron muestras de tejido foliar y de fruto infectado en cuatro localidades de Puerto Rico.  Los lugares muestreados fueron dos fincas familiares en Añasco y Las Marías, la Estación Experimental Agrícola de Isabela y la Finca Alzamora en Mayagüez.  Los síntomas observados  en el tejido foliar fueron defoliación, clorosis y necrosis; y en la corteza del fruto fueron manchas cremas, manchas necróticas, pudrición blanda, callos y cancros. Las muestras recolectadas se examinaron y procesaron en el laboratorio de fitopatología de la Universidad de Puerto Rico-Recinto de Mayagüez.  La extracción de tejido infectado se colocó en el medio de cultivo Potato Dextrose Agar para el crecimiento de hongos fitopatógenos.  Se obtuvieron 57 aislados de los cuales siete de estos fueron de limón y 50 de la china.  La frecuencia de las especies de la familia Botryosphaeriaceae en el cultivo de limón fue de un 71%, mientras que la frecuencia en el cultivo de la china fue de un 88%.  Basados en sus características macroscópicas cuatro aislados fueron agrupados dentro de la familia Botryosphaeriaceae.  Estos resultaron patogénicos al tejido foliar luego de completar los postulados de Koch. Esta investigación pretende utilizar técnicas moleculares para identificar las especies de hongos pertenecientes a la familia Botryosphaeriaceae que aparecen afectando las especies de cítricos en la isla.

Evaluación de la patogenicidad de hongos asociados a la muerte regresiva del bejuco de ñame florido (Dioscorea alata cv. Florido) en Puerto Rico

Yara I. Rosado Rivera¹ y Merari Feliciano Rivera²

¹Estudiante Graduada y ²Catedrática Auxiliar, Departamento de Ciencias Agroambientales

Colegio de Ciencias Agrícolas, Universidad de Puerto Rico, Mayagüez, Puerto Rico.

yara.rosado@upr.edu

El ñame florido (Dioscorea alata, L. cv. Florido), miembro de la familia Dioscoreácea, es uno de las raíces y tubérculos de mayor demanda en Puerto Rico. Desde los años 80 se ha visto un descenso en la producción local debido a diferentes plagas y enfermedades. Uno de los mayores limitantes de la producción y que además afecta la calidad de la semilla, es la antracnosis causada por el hongo Colletotrichum gloesporoides L. El objetivo de este estudio fue caracterizar hongos fitopatógenos causantes de la muerte regresiva del bejuco de ñame en condiciones de almacenaje. Se realizaron cámaras húmedas y aislamientos de tejido infectado en medio de papa y dextrosa (PDA) para la identificación de los hongos. Se realizaron pruebas de patogenicidad con ocho  aislados de hongos de los cuales seis resultaron ser patogénicos al bejuco del ñame. Al presente se han identificado tres géneros de Fusarium, uno de Colletotrichum  y dos de Botryosphaeria. Estos serán identificados a nivel de especie utilizando análisis molecular. Cabe recalcar la importancia de conocer que patógenos están asociados a este cultivo para poder desarrollar mejores prácticas fitosanitarias y poder tener un mejor manejo integrado de plagas y enfermedades a nivel de campo.

Growth inhibition of yeast isolated from SCUBA diving equipment found in La Parguera, Lajas, Puerto Rico by using common household chemicals

Vega-Padilla, M¹, Rodríguez, A. y Pérez-Matos, A.E.¹

¹Department of Biology, Chemistry and Natural Sciences, Interamerican University of Puerto Rico, San Germán, Puerto Rico

margell.vega@gmail.com

Self-contained underwater breathing apparatus (SCUBA) diving equipment if not properly cleaned can harbor potentially pathogenic yeast. Four yeast strains isolated from SCUBA equipment were subjected to growth inhibition tests with common household chemicals that could be used for cleaning such equipment. These chemicals were dilutions of Acetic Acid (vinegar), Citric Acid (lemon juice) and Sodium Hydrogen Carbonate (baking soda). The inhibition tests were performed following the method for Voriconazole that uses McFarland standards with the clinical laboratory standards institute (CLSI) Muller-Hinton agar with 2% dextrose added to the media. We found that the solutions with a low pH, such as concentrated vinegar and lemon juice, yielded inhibition zones in three of the four yeast isolates. However the dilutions with a higher pH, such as diluted vinegar or lemon juice or any baking soda dilution did not yield inhibition zones on any of the yeast isolates. Therefore our results suggest that concentrated solutions of the common household chemicals vinegar and lemon juice are a better alternative for cleaning SCUBA diving equipment.

Identificación mediante Grupos de Compatibilidad Vegetativa de las razas de Fusarium oxysporum f. sp. cubense afectando los cultivos de bananos en Puerto Rico

García-Rodríguez R.¹, Rivera-Vargas L.¹ y Irish B.²

¹Department of Crop and Agricultural Science, University of Puerto Rico, Mayagüez

²United States Department of Agriculture, Tropical Agriculture Research Station, Mayaguez, Puerto Rico

raymond.garcia1@upr.edu

Fusarium oxysporum es un complejo constituido por más de 122 formas especiales, esto dificulta el entendimiento de la diversidad genética del patógeno.  Es por esto que se ha desarrollado los Grupos de Compatibilidad Vegetativa (VCG), ya que al combinarse con otras técnicas como pruebas de patogenicidad, PCR y caracterización morfológica podrían brindar información relevante que contribuyan al entendimiento de la diversidad genética.  En este estudio se pretende mediante la técnica de VCG tener un entendimiento de la diversidad genética del patógeno afectando las diferentes variedades de guineos en la isla. Para esto se utilizaron 30 aislados monospóricos colectados en los municipios de  Isabela, Mayagüez y Gurabo de plantas de guineo sintomáticas, es decir que presentaban un amarillamiento en las hojas más viejas y una descoloración en el pseudotallo al realizar un corte transversal del mismo. Se generaron mutantes “nit” en PDC (PDA+KCLO₃) al 1.5 y 3%. Se colocaron en Agar Mínimo para confirmar que se generaron los mutantes “nit”. Después se transfirieron a 4 diferentes fuentes de nitrógeno (Nitrato, Nitrito, Amonio y Hypoxantina) para clasificarlos en nit 1, nit 3 y nit M de acuerdo a su crecimiento en estos medios. Por último, se llevaron a cabo las reacciones de complementación en Agar Mínimo para observar la formación  del heterocarion entre aislados del mismo VCG que el “tester”. Los “testers” utilizados fueron VCG 0124, VCG 0125, VCG 01210 y VCG 0120. Se espera que la raza 4 esté ausente y que los cultivos de bananos en la isla estén siendo afectados principalmente por la raza 1 y 2 del hongo.

Plant pathogenic fungi related to ten endangered plant species at the Karst Region in Puerto Rico

Cecilia Monclova-Santana¹, Merari Feliciano-Rivera² and Lydia Rivera Vargas³

¹Graduate Student, ² Assistant Professor, and ³Professor, University of Puerto Rico, Mayagüez Campus, Department of Crops and Agro-Environmental Sciences.

The karst region in Puerto Rico includes wet, moist and dry forest. Within it boundaries endangered plant and animal species find a special niche. Because of it uniqueness the habitat alteration could imply the total extinction of the species. Factors such as pest and diseases are overlooked as precursors of final extinction events. Thereby, this research aims to evaluate plant pathogenic fungi in ten endangered plant species in 8 forested areas of the karst region.  Plant populations were evaluated in terms of health, population viability, reproduction, quantity of individual and, associated plant pathogens. At each location, symptomatic tissue including leaves, fruit, flower or stem was collected for further analysis. Fungi were characterized using morphological features and three molecular markers (ITS, β-Tubulin and Elongation factors). Koch postulates were performed to determine the pathogenicity of the isolates. Pathogenicity test completed in Stahlia monosperma (“Cobana Negra”), Ottoschulzia rhodoxylon (“Palo de Rosa”), and Eugenia woodburyana (“Palo de Ramón”) confirmed that the fungus Pestalotia sp. was able to directly penetrate and colonized the plant tissue. In Banara vanderbiltii (“Palo de Ramón”) the fungus Lasiodiplodia pseudotheobromae was highly virulent causing necrotic progressive lesions on the foliage. Colletotrichum karstii and C. tropicale were identified using the molecular markers as associated pathogens to Eugenia woodburyana and Ottoschulzia rhodoxylon, respectively. Diaporthe pseudomangiferae was characterized affecting ‘Palo de Rosa’ causing reddish lessons only through an injury. To our knowledge this is the first report in Puerto Rico of these plant pathogens affecting endangered plant species. Further research is urgently needed to assess whether this pathogens are serious threats to their conservation. Thus, theses data will be useful in creating protocols for likely diseases to accomplish the preservation of endemic plant species.

Aquatic Hyphomycetes present in foam samples from Caguítas River, Caguas, Puerto Rico

Kiara I. Gómez Marie¹ y Dr. Chad Lozada Troche²

¹Departamento de Biología, Universidad de Puerto Rico, Recinto de Cayey

kiara.gomez@upr.edu

Aquatic hyphomycetes are microfungi found in foam samples, leaves and immersed plant material in fresh water streams. They are the primary degraders of plant organic matter that falls into the water. This study is centered on determining the biodiversity, frequency and abundance of this microfungi on foam samples from Caguitas River in Caguas, Puerto Rico. Samples were collected from September to November 2014. A total of 35 fungal species previously reported and 47 unknown species were identified through microscopic observation. The most common species were Dactylella submersa, Campylospora filicladia, Helicomyces colligatus, Helicomyces torquatus and Clavatospora tentacula. Species variation in frequency and abundance was observed when all the samples were compared. This variation may be due to physical and chemical changes such as water temperature, pH and the amount of substrate among other factors.

Spatial distribution of soil and leaf litter fungal communities in a simulated hurricane experiment.

Allison G, González K and Cantrell SA.

Department of Biology, Universidad del Turabo, Gurabo, PR 00778

scantrel@suagm.edu

It is known that fungal communities play an important role in soil and litter decomposition nutrient cycling. The Canopy Trimming Experiment being executed at the Luquillo Experimental Forest has been designed to understand the effects and recovery process of a tropical forest ecosystem after the impact of a hurricane. Identifying the changes in the fungal community structure in soil and forest floor litter can help understand the factors that influence ecosystem recovery. We studied and compared the fungal community structure in soil and leaf litter samples taken from two different treatments (undisturbed control and canopy opening and debris deposition) in three blocks (A, B, C) previously established on the forest. DNA was extracted using Power Soil DNA Isolation kit from MoBio. The TRFLP technique was used to obtain the profiles of the fungal communities of each sample using the fungal ITS region. The diversity between samples was analyzed using NMDS and UPGMA Cluster analysis using the Dice and Bray-Curtis similarity index. The results are showing spatial, seasonal and treatment changes. This analysis also showed heterogeneity between samples of the same blocks and an overall heterogeneity between all the samples. 

Isolation and identification of microorganisms in four species of angiosperms

Pagán Medina C. , Reyes Colón  y Acevedo Alfaro

¹Department of Biology, Pontifical Catholic University of Puerto Rico, Ponce, Puerto Rico

christianpagan1@pucpr.edu

Symbiotic relationships can be found in every ecosystem. Relationships established via symbiosis could be beneficial, negative, or neutral to the species involved. The purpose of the investigation was to identify microorganism’s relationships with angiosperms. The four edible plants selected for this study included: a Cuban variety of Magnifera indica, a grafted Magnifera indica, Spondias mombin and Annona muricata. To identify the microorganisms, we collected random leaves from angiosperm species. For the first assay, two leaves of each of the four species were immersed in eight individual sterile plastic bags, each filed with 10 mL of distilled water. Each of the eight water solutions was used to inoculate replicate sterilized Petri dishes with Tripticase Soy Agar (TSA) for bacteria and replicate sterilized Petri dishes with Czapek Agar for fungi. The eight immersed leaves from the first assay were used for the second assay, where the apex of each leaf was cut 2 cm from the tip and each was placed in the center of each fresh Petri dish with the same two media. Microorganisms accumulate at the leaf apex from runoff when it rains. Inoculated media for bacterial growth were incubated at 37°C for four days and the fungi at 25°C for six days. Six different genera of fungi were identified microscopically: Aspergillus group niger, Cladosporium, Curvularia, Fusarium, Penicillium, and Rhizopus. Results showed growth of other organisms such as yeast and some sterile mycelium. The Cuban variety of M. indica had the greatest fungal diversity, followed by A. muricata, the grafted M. indica, and S. mombin. No bacterial growth was observed in any cultures; however the TSA (for bacteria) supported some fungal growth. More species of fungi were obtained from the apex cut, suggesting that some were endophytic species. Additional experiments are needed to characterize the species of fungi isolated from these plants to determine their pathogenicity to these plants or to humans. Results obtained from these experiments are important because the fungi were found in four edible plants. Further experiments based on fungi pathogenicity can be the foundation for finding biological controls in order to rescue crops from fungal diseases and minimize economical loses.

CdS/Se nanoparticles with fungistatic activity on Dermatophytes

Jaime Cardona López, Yorki Serrano Natal, Nancy Arroyo, Luis Alamo-Nole

jaimecardona@pucpr.edu

Pontifical Catholic University of Puerto Rico, Ponce, PR 00717

Dermatophytosis is a disease caused by a group of keratinophilic fungi called dermatophytes.  These fungi affect the keratinized tissue, such as the epidermis, hair and nails. The disease is more prevalent in patients with immune deficiency. If it is not treated, it can cause more serious diseases like cellulitis, osteomyelitis and pyoderma. Current antifungal treatments expose the patients to unnecessary risks and to harmful side effects. Nanotechnology has come forth as a novel alternative due to the fact that nanoparticles can be functionalized to have target specificity and be biocompatible. QDs absorb light at 470 nm and fluoresce at 560 nm releasing reactive oxygen species (ROS) which are involve in cellular apoptosis. In this study, the antifungal activity of Cd-based quantum dots (QDs) against isolated dermatophytes was tested by traditional microbiological plating and  inhibition assays of the molds measured by colony growth diameter as compared to the control. Results have shown some morphological colony changes and possible fungistatic activity.

Characterization of Debaromyces hansenii Strains as Potential Treatment

 Against Superficial Mycosis

Yorki Serrano, Jaime Cardona& Nancy Arroyo

Pontifical Catholic University of Puerto Rico

yorkiserrano@pucpr.edu

Dermatophytes are medically important fungi that cause skin disorders such as pyoderma or dermatophytosis, which can spread from the affected area to feet, scalp, groin, or nails. We had collected 73 samples of patients with diverse skin lesions and 35 samples were positive for dermatophytes. The most common dermatophytes isolated were T. rubrum (37.14%) and T. mentagrophites (34.28%). These fungal species were identified on the basis of characteristic growth on selective and differential medium, a detailed study of their gross and microscopic morphology by comparison with standard descriptions given by Larone and using Riddle’s slide culture technique. We tested different Debaromyces hansenii strains against the dermatophytes in order to determine if the yeast killer toxin would affect fungal growth. We tested six D. hansenii strains, BCS 006, BCS 003, BCS 221, BCS 563, CBS 767 and Y17914, whose killer toxin activity had been tested in our lab against other fungi.  YPD-MB and SGA agar plates were inoculated with whole yeast cells. Once the agar/yeast solidified a squared agar block of dermatophyte (1cm³) was inoculated in the medium to determine killer toxin activity shown by an inhibition halo to test the fungistatic and/or fungicidal activity of all yeast strains on the dermatophytes. Improved and better defined inhibition halos showed that the strains BCS 003 and BCS 006 exhibited excellent fungistatic properties specifically against T.mentagrophites, with BCS 006 revealing a larger inhibition halo. These yeast strains could be considered a potential resource for treating skin disorders caused by dermatophytes.

Essential Oils’ Fungistatic and Fungicidal Activity Against  Penicillium sp., A Postharvest Fungus, Affecting Citrus Crops In Puerto Rico.Stephanie Torres, Kiara Rivera and Sr. M. Nancy Arroyo

Biology Department, Pontifical Catholic University of Puerto Rico, Ponce, PR 00717

stephanietorres1@pucpr.edu

Botanical pesticides have emerged as effective means to protect crops and their products and also the environment from chemicals. Previously, we had evaluated the antifungal activity of commercial plant extracts against the postharvest green mold (Penicillium sp.) affecting citrus crops. Of the essential oils tested in vitro, Peppermint (Mentha piperita) and Basil (Ocimum basilicum) had the strongest fungistatic activity as observed in the YPD-MB media growth inhibition test for which we added the pathogen to the media and inoculated the essential oil by the drop test method.  We tested other commercial plant extracts: Syzygium aromaticum (cloves), Cinnamomum verum (cinnamon leaf), Cinnamomum verum (cinnamon bark), Eucalyptus globus (eucaliptus), Origanum vulgare (oregano), Citrus tangerine (tangerine) and Annona muricata (soursop) against Penicillium sp. The growth inhibition assay was modified for all essential oils by adding the essential oil to the media (YPD, SGA and PGA) and then adding the green mold by the drop test. The in vitro results of peppermint and basil demonstrated their fungistatic activity against the green mold while oregano, cloves, cinnamon-leaf and cinnamon-bark showed a 100% growth inhibition of the same mold. These results revealed the fungistatic and fungicidal activity of these essential oils and their possible use as biocontrol agents for postharvest pathogens in citrus crops.

Biodiversidad de Hongos Macroscópicos  en los Municipios de Atolinga, Monte Escobedo, Tepetongo, Tlaltenango y Villanueva; Zacatecas, México.

Haro-Luna M.X¹.,  Calzada-Rodríguez B.E².  Miranda-Delgado P³., Reveles-Hernández  R.G⁴.

^1,2,3 Laboratorio de Biodiversidad y Colección Micológica de la Unidad Académica de Ciencias Biológica de la Universidad Autónoma de Zacatecas.

⁴ Laboratorio de Biodiversidad. Unidad Académica de Ciencias Biológicas.  Universidad Autónoma de Zacatecas.

mdppilar@hotmail.com

El reino Fungí incluye un gran número de individuos, encargados de descomponer la materia orgánica, contribuyendo a los ciclos biogeoquímicos. México ocupa el quinto lugar de países megadiversos. A los hongos que producen cuerpos reproductores macroscópicos se les denomina macromicetos. Este trabajo contribuye al conocimiento de la biodiversidad de macromicetos en el estado de Zacatecas y se realizaron descripciones taxonómicas a través de la evaluación de  caracteres tradicionales. Se colectaron cuerpos fructíferos en cuatro municipios, en los meses pos pluviales, el proceso de secado se realizó por calor, la identificación fue en base a las propiedades organolépticas y  físicas del píleo, estípite, himenio, lámina,  anillo, velo y volva. El estudio microscópico se realizó con Rojo Congo y Azul Lactofenol. Se realizaron pruebas macroquímicas con HCl, H₂SO₄, Anilina, Cloruro Férrico, Fenol, Nitrato de plata y  Sulfato de Hierro para la identificación de los géneros Amanita, Boletus, Agaricus, Cortinarius, y Russulas. Se colectaron 168 cuerpos fructíferos de los cuales se identificaron 84 hongos hasta género, siendo los más abundantes las rusulas con 13 ejemplares, luego las amanitas  con 9, 8 para lo Boletales, 5 Agaricales y 5 Panaeolus. México cuenta con pocos estudios sobre biodiversidad fúngica y el presente trabajo incrementó el conocimiento de la biodiversidad  a partir de cuatro municipios del Suroeste del Estado de Zacatecas. Este trabajo se centró en la taxonomía básica de los hongos; se desarrolló en base al análisis de estructuras morfológicas y pruebas bioquímicas, para la Identificación se utilizaron las guías de Gastón Guzmán 1990, Gerhardt et al. 2000 y Baltazar et al. 2010. Las cuales coinciden las características morfológicas con lo reportado. La diversidad encontrada asciende a 84 hongos identificados contenidos en 29 Familias para el estado de Zacatecas.

Growth Inhibition and Induced Sporulation by Caffeine in the Plant Pathogen Pencillium expansum

Vivianaliz Sánchez Pérez, Michael C. Tirado, Jasmine Seda Miró

Pontificia Universidad Católica de Puerto Rico - Ponce

vivianalizsanchez@pucpr.edu

Penicillium expansum is a plant pathogen that infects certain fruits and causes rotting during post-harvest. Although it is associated with various fruits, it is considered to be a host pathogen for apples and a non-host pathogen for other fruits. Naturally-produced antifungal agents, such as caffeine, have been studied because of its effect on the cell wall and growth inhibition in susceptible fungi. The purpose of this study was to evaluate the inhibitory effect of caffeine on P. expansum at different stages of growth. Fungal spores were inoculated on Czapek-Dox Yeast Agar (CYA) with caffeine concentrations ranging from 0.5 mg/ml to 10.0 mg/ml and incubated at 25 °C for 10 days. Percent of growth inhibition was determined for each concentration based on the diameter of the colony versus the control. More than 90% inhibition was observed at concentrations greater than 2.5 mg. The pathogen was also exposed to a solution of 1 mg of caffeine in CYA and was grown for 0 to 7 days. Induced sporulation after exposure to caffeine at day 4 of mycelial growth was evident after several days of incubation whereas the control sustained mycelial growth. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined as 7.5 mg/ml after 10 days of incubation. Taxonomic identification using molecular techniques were performed to confirm pathogens’ identity. Further study on the activation of genes associated with sporulation and exposure to caffeine will be explored. Other inhibitory effects, such as reduced mycotoxin production, will also be evaluated in future studies.

Seasonality and Prevalence: A population study of Asellaria jatibonicua hosted in the hindgut of Litthorophiloscia culebrae

María del Mar Monroig¹, Ivonne M. Rivera², Matías J. Cafaro³

¹ Undergraduate Student, ² Graduate student and ³Professor, Department of Biology, University of Puerto Rico, Mayagüez Campus,  Mayagüez, Puerto Rico.

The trichomycetes are microorganisms associated with the gut of arthropods. They are an ecological group composed of protists (Ichthyosporea) and fungi (Kickxellomycotina) that converged in a similar life style evolutionary solution with key adaptations to their gut environment. Isopods in particular harbor fungal members belonging to the Asellariales. One essential aspect of the ecology of the Asellariales is to understand the environmental conditions associated to the isopods. For instance, the different environmental fluctuations of temperature, water precipitation and relative humidity affect isopod lifestyle and thus, the life cycle of these fungi. In this study, isopods were collected in the University of Puerto Rico - Mayagüez and dissected in the laboratory the same day. We determined an average prevalence of 26% over 18 months and observed seasonality behavior of Asellaria jatibonicua associated with the terrestrial isopod Litthorophiloscia culebrae Moore, 1901. We have found L. culebrae in different forests of Puerto Rico, including Río Abajo, Guajataca and Toro Negro and in an urban locality in Mayaguez. Data show a low prevalence of the fungus in the less humid months (with the lowest prevalence of 7% in August 2012 and 8% in March 2013)  increasing towards the more humid months (with the highest prevalence of 44% in September 2012 and 55% in December 2012). In addition, during this study we found another trichomycete in the same host, Parataeniella sp. (Ichthyosporea: Eccrinales), which represents a first record for Puerto Rico and a new species for science.

Identificación molecular de Colletotrichum sp. aislados de Cucurbitaceas

Ángel G. Colón ¹ Darianne M. Alvaréz²  y Lydia I. Rivera Vargas³

¹Estudiantes Subgraduado, ²Graduada y ³Catedrática, Departamento de Cultivos Agroambientales

angel.colon21@upr.edu

Las cucurbitáceas comprenden cerca de 130 géneros y aproximadamente 900 especies de plantas, algunas de gran importancia agrícola. En Puerto Rico, la calabaza (Cucumis moschata) ocupa el segundo lugar entre las hortalizas de mayor importancia económica. Colletotrichum sp. es causante de una enfermedad común en el follaje dentro de la familia Cucurbitaceae. Además, produce caída prematura de los frutos,  reduciendo considerablemente su producción. El objetivo de esta investigación es identificar las especies de Colletotrichum que afectan las cucurbitaceas. Para llevar a cabo la investigación se seleccionaron aislados de Colletotrichum obtenidos de tejido foliar de calabaza (Cucumis moschata), chayote (Sechium edule) y calabacín (Cucurbita pepo). Los aislados se caracterizaron macro y microscópicamente. El aislado no. 1 obtenido de calabaza produce micelio escaso blanco, las colonias  presenta exudados con  coloración anaranjada, y producción reducida de acérvulos en medio de cultivo (PDA). En cambio, el aislado no. 2 obtenido de calabacín produce abundante micelio blanco aéreo con exudados de coloración  anaranjada y no produce acérvulos en PDA. El aislado no. 3 obtenido  de chayote produce escaso micelio grisáceo con gran cantidad de exudado anaranjado y producción abundante de acérvulos en PDA. Se realizaron mediciones del largo y ancho de los conidios, estos fluctuaron entre 13 a 13.3μm de largo y 4.6 a 4.9μm de ancho. Las diferencias  del tamaño de la conidios entre aislados resultaron no ser estadísticamente significativos (p > 0.05). Los  aislados no. 1 y 2 no produjeron setas en el medio de cultivo.  Para complementar la caracterización de los aislados se  analizarán  las regiones genéticas  ITS del ADNr,  actina, sintetasa de chalcona y la gliceraldehído-3-fostato deshidrogenasa.  Esta caracterización molecular y morfológica, no sólo nos proporcionará información básica de las especies de Colletotrichum sp. afectando las cucurbitáceas, si no que nos permitirá realizar un manejo más efectivo  del patógeno en el campo.

Distribución de Badhamia gracilis (Phasarales, Phasaraceae) en Cactus en el Suroeste de Puerto RicoOscar Pérez-Laguillo, Marlene Lorenzo Suarez,  Maranyelie Ramos-Acevedo, Cristina Rodríguez-Chaluisant e Yrenis Caraballo-Chaparro

Departamento de Ciencias. Pontificia Universidad Católica de Puerto Rico, Mayagüez, PR

El estudio de la presencia de mixomicetos en cactus en Puerto Rico se realizó durante los meses de septiembre de 2014 a febrero de 2015. El estudio comprendió los bosques y reservas de Las Salinas, Boquerón, Guánica y Susúa, e incluyeron los cactus Consolea rubescens (Salm-Dyck) Lem.; Leptocereus quadriscostatus (Bello) Britton & Rose; Melocactus intortus (Miler) Urban; Pilosocereus royenii (L.) Byles & Rowley; y Stenocereus fimbriatus (Lam.) Lourteig. La única especie de mixomiceto obtenida fue Badhamia gracilis Macbride (Macbride & Martin) aislada de cultivos en cámara húmeda de material muerto de L. quadriscostatus, P. royenii, y M. intortus; y de material vivo, mediante observaciones de campo en P. royenii. Este estudio presenta el primer registro de la presencia de un mixomiceto en L. quadriscostatus (endémica de Puerto Rico e Islas Vírgenes Británicas) y M. intortus (amplia distribución por las islas del Caribe).